Что такое пиф анализ

Posted by workscan on in Форекс и биржа

Что такое пиф анализ

Лабораторная диагностика хламидийной инфекции

В статье представлены современные эти по микроскопии, иммунофлюоресценции, иммуноферментному способу, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и культуральному способу, использующимся в диагностике инфицирования Chlamydia trachomatis. Способы генодиагностики (ПЦР) являются более действенными если сравнивать с традицинными (изоляция хламидии трахоматис в культуре, иммунофлюоресценция, микроскопия, иммуноферментные способы).

Недочётом ПЦР смогут являться ложноположительные результаты благодаря контаминации ДНК. К ложноотрицательным итогам смогут приводить наличие ингибиторов ПЦР в клинических примерах.

ВВЕДЕНИЕ

Для точной диагностики хламидиоза нужен комплекс лабораторных способов, разрешающих распознать возбудителя и стадию заболевания.

Бессчётные клинико-эпидемиологические изучения говорят о широком распространении хламидий как возбудителя, передающегося в основном половым методом. Chlamydia trachomatis есть грамотрицательным паразитирующим микробом, инфицирующим эпителий слизистых поверхностей урогенитального тракта, носоглотки и конъюнктивы глаз и вызывающим их воспалительные болезни. Эти болезни имеют тенденцию к хронизации с развитием бессчётных осложнений [2,3,11].

Принято вычислять, что в 50-80% случаев нарушения репродуктивной сферы у дам позваны смешанными заразами, среди которых, не считая хламидий, чаще всего видятся микоплазмы и уреаплазмы [5,6,7,9].

Долгое бессимптомное течение и множественные неспецифические клинические проявления затрудняют симптоматическую диагностику хламидиоза, в связи с чем главное значение покупают лабораторные способы исследования[1,13].

ЛАБОРАТОРНЫЕ СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ

ЦИТОСКОПИЧЕСКИЕ СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ХЛАМИДИЙ

При цитоскопическом способе в один момент с поиском цитоплазматических клеток-включений Гальбершедтера-Провачека учитывается количество лейкоцитов как показателя воспаления, и дополнительная информация о наличии сопутствующей бактериальной микрофлоры, дрожжеподобных грибов, трихомонад и т.п.

Материалом для изучения помогают соскобы из уретры у уретры и мужчин и / либо цервикального канала у дам. Материал берут особыми щеточками либо ложечками Фолькмана. Выделения из цервикального канала удаляются ватным тампоном. Щеточка вводится в канал на 1-2 см, вращается 15 секунд.

Соскобный материал распределяется на предметном стекле, высушивается на воздухе и фиксируется в метаноле либо холодном ацетоне. Самый популярна окраска по Романовскому-Гимзе. По окончании окраски препараты просматриваются в световом микроскопе, применяя иммерсионный объектив (х90). Наряду с этим цитоплазма клеток окрашивается в светло синий цвет, ядра — в фиолетово-светло синий, цитоплазматические включения определяются в виде темно-светло синий либо розовых микроколоний на фоне светло синий цитоплазмы.

На стадии элементарных включений хламидии окрашиваются в розовый цвет, на стадии элементарных телец — в светло синий.

Цитоскопический способ обширно дешёв, но действен только при острых формах заразы, намного менее действен и информативен при хронических формах заболевания. При урогенитальном хламидиозе частота обнаружения телец Провачека в соскобах цервикального канала и уретры не превышает 10-12 %. Наличие этих телец подтверждает диагноз хламидиоза, но их отсутствие не исключает наличие заразы [5].

ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СПОСОБЫ

Эти способы основаны на обнаружении антигенных субстанций хламидий в других тканях и эпителии методом обработки препаратов антителами. Антитела диагностической антихламидийной сыворотки соединены с какой-либо меткой — люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) либо ферментной (энзим-меченые антитела) [10].

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ)

Данный способ предусматривает прямое обнаружение антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии хламидийные включения определяются в виде образований

в клетке эпителия с зеленой либо желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток. Включения смогут иметь зернистую, гомогенную либо смешанную структуру.

Показаниями для диагностики хламидийной инфекции этим способом являются:

  • Острая фаза заболевания.
  • Хроническая фаза заболевания.
  • Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
  • Беременность при отягощенном акушерском анамнезе.
  • Бесплодие неясного генеза.

Диагностическая информативность ПИФ связана с тем, что с ее помощью выявляются не только корпускулярные, но и растворимые антигены хламидий. Данный способ не зависит от вероятного трансформации тинкториальных особенностей микроорганизма в ходе лечения и заболевания. ПИФ-способ есть наиболее значимым скрининговым способом диагностики урогенитального хламидиоза.

Его специфичность и чувствительность при применении моноклональных антител образовывает 65-90% и 85-90% соответственно. При оценке результатов направляться учитывать, что лишь показатели флюоресценции внутриклеточных включений смогут оцениваться в качестве хорошего результата этого теста при применении поликлональных антихламидийных антител.

При применении моноклональных — итог вычисляют хорошим при наличии 10 элементарных телец (ЭТ) в поле зрения либо хотя бы одного внутриклеточного включения. Соскобные препараты готовят кроме этого, как и для цитоскопических изучений.

Моноклональные антитела отличаются друг от друга по яркости флюоресценции, постоянству выявляемых форм ЭТ и степени специфичности. Для диагностики хламидий этим способом нужен люминесцентный микроскоп.

Непрямой способ иммунофлюоресценции

Непрямой способ иммунофлюоресценции используют в тех случаях, в то время, когда нет в наличии ФИТЦ-конъюгата антихламидийных антител. Показания к применению и специфичность данного способа совпадают с ПИФ.

СПОСОБЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА.

Эти способы основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в исследуемых пробах.

Обнаружение в сыворотке крови антител к липополисахаридному антигену хламидий класов IgG, IgA, IgM с определением их титра разрешает выяснить стадию заболевания, обосновать необходимость бактерицидного лечения и оценить его эффективность.

Показания к обнаружению антихламидийных антител классов Ig G, Ig A, Ig M в сыворотке крови способом ИФА

1. Определение стадии заболевания:

  • острая, первичная;
  • хроническая;
  • реактивация либо реинфекция;
  • состояние по окончании реконвалесценции (остаточная серология).

2. Оценка эффективности проводимого лечения (наровне с изучением культуральным способом и ПЦР).

3. Установление хламидийной этиологии экстрагенитальных поражений (артриты, пневмонии, заболевания глаз).

В промежутке между пятым и двадцатым днями по окончании появления клинических признаков заболевания последовательно появляются антитела этих трех классов к своеобразному хламидийному липополисахариду. Ig M есть маркером острой стадии, они определяются уже через пять дней по окончании начала заболевания. В течение 10 дней по окончании появления признаков заболевания происходит смена IgM на IgА.

В течение маленького периода смогут в один момент находиться Ig M и Ig A. Одвременно с этим, либо с маленькой задержкой в 2-3 семь дней, смогут быть выяснены и IgG. Прогрессирование заболевания, переход в хроническую стадию характеризуется возникновением Ig A, Ig G- антител ( таблица 1).

Таблица 1. Определение стадии заболевания на основании обнаружения антител классов IgG, IgA, IgM

Cтадия заболевания

Источник: medservis.az

Курс лекций «Фондовый рынок». Лекция 4: Виды ПИФ

Важное на сайте:

Самые интересные результаты статей, подобранные именно по Вашим интересам: